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實驗室環(huán)境和人體表面微生物的檢查實驗

1.  寫標(biāo)簽
任何一個實驗,在動手操作前均需shou先將器皿用記號筆做上記號,培養(yǎng)皿的記號一般寫在皿底上。如果寫在皿蓋上,同時觀察兩個以上培養(yǎng)皿的結(jié)果,打開皿蓋時,容易混淆。用記號筆寫上班級、姓名、日期,本次實驗還要寫上樣品來源(如實驗室空氣或無菌室空氣或頭發(fā)等),字盡量小些,寫在皿底的一邊,不要寫在當(dāng)中,以免影響觀察結(jié)果。

2.  實驗室細(xì)菌檢查

(1)空氣將一個肉膏蛋白胨瓊脂平板放在當(dāng)時做實驗的實驗室,移去皿蓋,使瓊脂培養(yǎng)基表面暴露在空氣中;將另一肉膏蛋白胨瓊脂平板放在無菌室或無人走動的其他實驗室,移去皿蓋。一小時后蓋上兩個皿蓋。

(2)實驗臺和門的旋鈕

①用記號筆在皿底外面中央畫一直線,再在此線中間處畫一垂直線。

②取棉簽左手拿含有棉簽的試管,在火焰旁用右手的手掌邊緣和小指、無名指夾持棉塞(或試管帽),將其取出,將管口很快地通過煤氣燈(或酒精燈)的火焰,燒灼管口;輕輕地傾斜試管,用右手的拇指和食指將棉簽小心地取出。放回棉塞(或試管帽),并將空試管放在試管架上。

③弄濕棉簽左手取滅菌水試管,如上法拔出棉塞(或試管帽)并燒灼管口,將棉簽插入水中,再提出水面,在管壁上擠壓一下以除去過多的水分,小心將棉簽取出,燒灼管口,放回棉塞(或試管帽),并將滅菌水試管放在試管架上。

④取樣將濕棉簽在實驗臺面或門旋鈕上擦拭約2平方厘米的范圍。
 
⑤接種,A在火焰旁用左手拇指和食指或中指使平皿開啟成一縫。再將棉簽伸入,在瓊脂表面頂端接種(滾動一下),立即閉合皿蓋。將原放棉簽的空試管拔出棉塞(或試管帽),燒灼管口,插入用過的棉簽,將試管放回試管架。

⑥劃線另取接種環(huán)在火焰上滅菌,先將環(huán)端燒熱,然后將接種環(huán)提起垂直放在火焰上,以使火焰接觸金屬絲的范圍廣一些,待接種環(huán)燒紅,再將接種環(huán)斜放,沿環(huán)向上,燒**可能碰到培養(yǎng)皿的部分,再移向環(huán)端,如此很快地來回通過火焰數(shù)次。

左手拿起平板,同樣開啟一縫,將滅過菌并冷卻了的接種環(huán)(可在瓊脂表面邊緣空白處試溫度,若發(fā)出濺潑聲,表示太燙),通過瓊脂頂端的接種區(qū),向下劃線,直到平板的一半處。注意:接種環(huán)與瓊脂表面的角度要小,移動的壓力不能太大,否則會刺破瓊脂。

閉合皿蓋,左手將平板向左轉(zhuǎn)動**空白處,右手拿的接種環(huán)再在火焰上燒灼,使冷。接種環(huán)通過前面劃的線條再在瓊脂的另一半,從上向下來回劃線**1/2處。

燒灼接種環(huán),轉(zhuǎn)動平板,劃**后1/4,立刻蓋上皿蓋,燒灼接種環(huán),放回原處。整個劃線操作均要求無菌操作,即靠近火焰,而且動作要快。

3.  人體細(xì)菌的檢查

(1)手指(洗手前與洗手后)

①分別在兩個瓊脂平板上標(biāo)明洗手前與洗手后(當(dāng)然,班級、姓名、日期各項在每次寫標(biāo)簽時是必不可少的)。

②移去皿蓋,將未洗過的手指在瓊脂平板的表面,輕輕地來回劃線,蓋上皿蓋。

③用肥皂和刷子,用力刷手,在流水中沖洗干凈,干燥后,在另一瓊脂平板表面來回移動,蓋上皿蓋。

(2)頭發(fā):在揭開皿蓋的瓊脂平板的上方,用手將頭發(fā)用力搖動數(shù)次,使細(xì)菌降落到瓊脂平板表面,然后蓋上皿蓋。

(3)咳嗽:將去蓋瓊脂平板放在離口約6~8 cm 處,對著瓊脂表面用力咳嗽,然后蓋上皿蓋。

(4)鼻腔

①按照實驗臺檢查法的步驟②和③,取出棉簽,并將其弄濕。

②用濕棉簽在鼻腔內(nèi)滾動數(shù)次。

③按實驗臺檢查法的步驟④和⑤,接種與劃線,然后蓋上皿蓋。

4.  將所有的瓊脂平板翻轉(zhuǎn),使皿底在上,放37℃培養(yǎng)箱,培養(yǎng)1~2天。

5.  結(jié)果記錄方法

(1)菌落計數(shù)在劃線的平板上,如果菌落很多而重疊,則數(shù)平板**后1/4面積內(nèi)的菌落數(shù)。不是劃線的平板,也一分為四,數(shù)1/4面積的菌落數(shù)。

(2)根據(jù)菌落大小、形狀、高度、干濕等特征觀察不同的菌落類型。但要注意,如果細(xì)菌數(shù)量太多,會使很多菌落生長在一起,或者限制了菌落生長而變得很小,因而外觀不典型,故觀察菌落的特點時,要選擇分離得很開的單個菌落。

菌落特征描寫方法如下:

①大小大、中、小、針尖狀??上葘⒄麄€平板上的菌落粗略觀察一下,再決定大、中、小的標(biāo)準(zhǔn),或由教師指出一個大小范圍。

②顏色黃色、金黃色、灰色、乳白色、紅色、粉紅色等。

③干濕情況干燥、濕潤、粘稠。

④形態(tài)圓形、不規(guī)則等。

⑤高度扁平、隆起、凹下。

⑥透明程度透明、半透明、不透明。

⑦邊緣整齊、不整齊。

6.  結(jié)果

(1)將你自己的平板結(jié)果記錄于下表中。